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Quando o resultado negativo também é dado científico
Uma amostra que não amplifica não prova que a espécie está ausente. Por que a BIOTA documenta as tentativas, inclusive as que não resultam em sequência válida.
Sob a perspectiva científica, resultados negativos, inconclusivos ou tecnicamente insatisfatórios também constituem informação relevante, desde que obtidos por procedimentos adequados, acompanhados de controles de qualidade e devidamente documentados.
O que um resultado negativo pode indicar
A ausência de amplificação, a baixa qualidade das sequências ou a impossibilidade de identificação molecular podem informar sobre a integridade e a concentração do material genético, a presença de inibidores, a compatibilidade dos marcadores e as limitações do método. Por isso, esses resultados não devem ser interpretados automaticamente como ausência da espécie ou do material genético investigado.
Quando não existe primer pronto
Nem sempre há primers descritos ou validados para o grupo investigado, sobretudo em espécies raras, pouco estudadas ou com poucas informações em bancos de dados. Nesses casos, pode ser necessário pesquisar bases moleculares, desenhar primers específicos, fazer análises in silico e testes de especificidade, ajustar temperatura de anelamento e concentrações de reagentes e validar os marcadores em laboratório, em sucessivas tentativas e sem garantia prévia de sucesso.
As tentativas ficam registradas
As tentativas realizadas são registradas no banco de dados e nos relatórios técnicos, inclusive quando não resultam em sequências adequadas. A documentação permite avaliar o esforço analítico, o desempenho dos métodos e a necessidade de ajustes.